Бактерии группы кишечной палочки (бгкп) и сальмонеллы: характеристика, санитарно-показательное значение, методы определения, нормирование в пищевых продуктах. Колиформные бактерии в воде

Санитарная микробиология

Рецензент: Зав. кафедрой эпидемиологии ПГМА,

© ГОУ ВПО «ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава»

1. Предмет санитарной микробиологии с3
2. Принципы и методы проведения санитарно-микробиологических исследований с3
3. Основные группы санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) с5
4. Санитарная микробиология воды с11
5. Санитарная микробиология почвы с14
6. Санитарная микробиология воздуха с15
7. Санитарно-микробиологические исследования в медицинских учреждениях с16
8. Тестовые задания с19

Санитарная микробиология – наука, изучающая микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и экологическую ситуацию в различных биотопах. Главная задача практической санитарной микробиологии – раннее обнаружение патогенной микрофлоры во внешней среде. При этом следует помнить, что человек и теплокровные животные являются основным резервуаром возбудителей большинства инфекционных заболеваний и подавляющее число возбудителей передается с помощью аэрогенного и фекально-орального механизмов.

Началом развития санитарной микробиологии можно считать 1888 год, когда французский врач Е. Масе предложил считать кишечную палочку показателем фекального загрязнения воды.

Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований

1. Правильный забор проб. Его проводят с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта. Соблюдается стерильность. При невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 часов.
2. Серийность проводимых анализов. Большинство исследуемых объектов содержит самые разнообразные микроорганизмы, распределенные крайне неравномерно. Проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы смешивают, а затем точно отмеряют необходимое количество материала (обычно среднее по отношению к исследуемому материалу в целом).
3. Повторность отбора проб. Как правило, в исследуемых объектах состав микрофлоры меняется достаточно быстро, кроме того, патогенные микроорганизмы распределяются в них неравномерно. Соответственно повторный отбор проб позволяет получить более адекватную информацию.
4. Применение только стандартных методов исследования – дает возможность получать сравнимые результаты в различных лабораториях.
5. Использование комплекса тестов: прямых (выявляющих патогены) и косвенных.
6. Оценка объектов по совокупности полученных результатов – с учетом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических и т.д.)

Методы проведения санитарно-микробиологических исследований

Практическая санитарная микробиология использует два основных метода оценки санитарно-эпидемического состояния среды.

I. Методы прямого обнаружения возбудителя . Являются наиболее точными и надежными критериями оценки эпидемической опасности внешней среды. Основной недостаток – низкая чувствительность.

Трудность выделения патогенных микроорганизмов на питательных средах обусловливают следующие факторы:

1. Сравнительно низкое содержание патогенных микроорганизмов во внешней среде, составляющих 1/30000 всего видового состава микрофлоры внешней среды. Кроме того, она распределена неравномерно.
2. Выделение одного возбудителя не всегда свидетельствует о присутствии других видов патогенов. То есть, необходимо проводить исследования практически в отношении каждого патогена, что не осуществимо.
3. Изменчивость патогенов. Последние, попадая во внешнюю среду, приобретают новые свойства, затрудняющие их распознавание.
4. Конкурентные взаимоотношения между патогенами и сапрофитами при совместном выращивании на питательных средах.
5. Недостаточная элективность питательных сред и необходимость использования лабораторных животных и культур тканей.

II. Методы косвенной индикации возможного присутствия возбудителя во внешней среде.

Используют два критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:

1. Общее микробное число (ОМЧ)
2. Содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ)

- Общее микробное число (ОМЧ) определяют путем подсчета всех микроорганизмов в 1 грамме или 1 мл субстрата.

При этом исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако, это не всегда так, так как ОМЧ может быть большим за счет сапрофитов, а патогены могут отсутствовать. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами.

ОМЧ определяют двумя методами:

1. Прямой подсчет. Проводят под микроскопом с помощью специальных камер, например, Петрова или Горяева, либо специальных электронных счетчиков. Предварительно исследуемую пробу гомогенизируют и вносят краситель (обычно эритрозин). Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь. Метод применяют в экстренных случаях. При необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток – невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата. Не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах. И, наконец, нельзя отличить живые от погибших микроорганизмов.
2. Количественный посев на питательные среды. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным до 45-50 0 С МПА. Равномерно смешивают жидкости и после застывания агара чашки помещают в термостат. После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведений высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. При этом выявляются лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные бактерии, способные размножаться на МПА. Таким образом, получаемые цифры значительно ниже истинного количества микроорганизмов в исследуемом объекте.

-Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. Исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен экстрактами человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов.

Основные характеристики СПМ:

1. Микроорганизм должен постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.
2. Микроб не должен размножаться во внешней среде (исключая пищевые продукты), или размножаться незначительно.
3. Длительность выживания микроба во внешней среде должна быть не меньше, а даже больше, чем у патогенных микроорганизмов.
4. Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов.
5. У микроба не должно быть во внешней среде «двойников»или аналогов, с которыми их можно перепутать.
6. Микроб не должен изменяться во внешней среде, во всяком случае, в сроки выживания патогенных микроорганизмов.
7. Методы идентификации и дифференциации микроорганизмов должны быть простыми.

СПМ условно разделяют на 3 группы.

Между ними нет четко очерченных границ; некоторые микроорганизмы являются как показателями фекального, так и аэрогенного загрязнения. Все СПМ расценивают как индикаторы биологического загрязнения.

Группа А включает обитателей кишечника человека и животных; микроорганизмы расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят так называемые бактерии группы кишечных палочек – БГКП. (для питьевой воды по новому нормативному документу - Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды. Методические указания МУК 4.2.1018-01 – данная группа называется общие колиформные бактерии ОКБ); БГКП – ОКБ, эшерихии, энтерококки, протеи, сальмонеллы; а также сульфит-восстанавливающие клостридии (включая Cl.perfringens ), термофилы, бактериофаги, синегнойная палочка, кандиды, ацинетобактеры и аэромонады.

Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки; микроорганизмы расценивают как индикаторы аэрогенного загрязнения. В нее входят альфа- и бета-гемолитические стрептококки, стафилококки (плазмакоагулирующие, лецитиназа-положительные, гемолитические и антибиотикоустойчивые; в некоторых случаях определяют вид стафилококка – золотистый).

Группа С включает сапрофитные микроорганизмы, обитающие во внешней среде; микроорганизмы расценивают как индикаторы процессов самоочищения. В нее входят бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты и др.

Титр СПМ – наименьший объем исследуемого материала (в мл) или весовое количество (в гр), в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.

Индекс СПМ – количество особей СПМ, обнаруженных в определенном объеме (количестве) исследуемого объекта. Для воды, молока и других жидких продуктов – в 1 л; для почвы, пищевых продуктов – в 1 г. Индекс – величина, обратная титру, поэтому перерасчет титра в индекс и обратно можно производить по формуле: Т=1000/И; И=1000/Т – для жидкостей. Соответственно для почвы и пищевых продуктов Т=1/И, И=1/Т.

Как дополнительный показатель в настоящее время также используют индекс наиболее вероятного числа (НВЧ), имеющий доверительные границы, в пределах которых может колебаться истинное количество искомого микроба с 95% вероятностью. Для определения НВЧ исследования проводят 3, 5, и 10 раз. Показатель определяют по специальным таблицам Хоскенса-Муре.

Основные группы СПМ

Бактерии группы кишечных палочек

Под общим названием «бактерии группы кишечных палочек» – БГКП – объединяются бактерии семейства Enterobacteriaceae, родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella. По новым нормативном документам, изданным после 2001 года, данная группа называется общие колиформные бактерии - ОКБ. Характеристика данных групп одинакова, к БГКП-ОКБ относятся грамотрицательные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу и глюкозу до кислоты и газа при температуре 37 0 С за 24 часа и не обладающие оксидазной активностью. Использование двух названий одной и той же группы бактерий связано с применением нормативных документов различного года выпуска. Например, в действующем Приказе № 720 от 31 июля 1978 г. «Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией» данная группа называется БГКП и в результатах исследований, проведенных в соответствии с данным Приказом, будет отмечено – БГКП обнаружены (не обнаружены). А при исследовании воды питьевой по методическим указаниям от 2001 года будет отмечено – ОКБ обнаружены (не обнаружены).

Escherichia coli

Микроорганизм является родоначальником всех СПМ. Это основной представитель группы ОКБ, в зависимости от цели и объекта исследования, в данной группе выделяют подгруппу ТКБ – термотолерантных колиформных бактерий.

Общие колиформные бактерии - ОКБ – грам-, оксидаза-, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до КГ при t 0 37 0 С в течение 24 часов.

Термотолерантные колиформные бактерии - ТКБ – входят в число ОКБ, обладают всеми их признаками, кроме того, способны ферментировать лактозу до КГ при t 0 44 0 С в течение 24 часов.

Как дополнительный тест используется определение ферментации глюкозы при различной температуре культивирования, поскольку известно, что ОКБ, выделяемые из хлорированной воды (водопроводной, плавательных бассейнов и др.), не способны вызывать сбраживание глюкозы с образованием газа при температуре 44 0 С.

Существенными недостатками E.coli как СПМ являются:

1. Обилие аналогов во внешней среде;

2. Недостаточная устойчивость к неблагоприятным воздействиям внешней среды, например, к различным химическим веществам и изменениям рН. В тоже время некоторые патогенные микроорганизмы, особенно энтеровирусы, к ним более устойчивы;

3. Высокая вариабельность, в результате чего вопросы ее экологии и диагностики не являются окончательно решенными;

4. Относительно короткое время выживания в пищевых продуктах, в то время как некоторые патогенные микроорганизмы (например, S.sonnei, S.schottmuelleri , энтеровирусы) сохраняются длительное время;

5. Кишечная палочка размножается в воде при содержании органических веществ не менее 280 мкг/л;

6. Кишечная палочка является нечетким индикатором. Например, известны вспышки сальмонеллеза водного происхождения при содержании возбудителей до 17 бактерий на 1 л, в то время как содержание E.coli не превышало 4 бактерий на 1 л, то есть оставалось почти нормальным.

Бактерии рода Enterococcus

В качестве СПМ предложены Хаустоном (1910). Род включает 16 видов, основные поражения у человека вызывают E.faecalis, E.faecium, E.durans. Эти бактерии отвечают целому ряду требований, предъявляемых к СПМ.

1. Энтерококки являются постоянными обитателями кишечника человека, несмотря на то, что в количественном отношении их меньше, чем кишечных палочек.

2. Бактерии практически не способны размножаться во внешней среде (температура должна быть 20 0 С и содержание органических веществ должно быть 375 мкг/л).

3. Энтерококки не проявляют выраженной изменчивости во внешней среде, что облегчает их распознавание.

4. Энтерококки не имеют аналогов во внешней среде.

5. Энтерококки отмирают во внешней среде значительно раньше, чем E.coli, поэтому они всегда свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении.

6. Самым главным достоинством энтерококков является их устойчивость к неблагоприятным внешним воздействиям. Энтерококки дифференцируют по тестам устойчивости Шермана.

а) Энтерококки устойчивы к нагреванию до 65 С в течение 30 минут, что делает их показателем качества термической обработки или пастеризации.

б) Энтерококки устойчивы к высоким концентрациям NaCl (6,5-17%) – СПМ при исследовании морской воды.

в) Энтерококки устойчивы к колебаниям рН (3-12), что позволяет использовать их в качестве индикатора фекального загрязнения в кислых и щелочных продуктах (сточные воды). В подобных условиях E.coli быстро теряет свои свойства и становится труднораспознаваемой.

По количеству и соотношению энтерококков и кишечных палочек судят о массивности и сроках фекального загрязнения.

Бактерии рода Proteus

Являются третьей (по значимости) группой СПМ. В качестве СПМ предложены еще в 1911 г. Род включает 4 вида; наибольшее значение имеют P.vulgaris, Р.mirabilis. При этом P.vulgaris обычно рассматривают как показатель загрязнения объекта органическими веществами (т.к. его чаще обнаруживают в гниющих остатках), а Р.mirabilis – как показатель фекального загрязнения (чаще обнаруживают в фекалиях). P.rettgeri чаще выявляют в испражнениях при кишечных инфекциях – поэтому его обнаружение свидетельствует об эпидемиологическом неблагополучии. Представители родаProteus дают характерный «ползучий» рост на средах Эндо и Левина, часто затягивающий всю чашку. Можно проводить выделение протея по методу Шукевича – посевом в конденсат свежескошенного МПА (у дна пробирки) – если в пробе имеется протей, затянет весь скос агара.

Присутствие протеев в воде, пищевых продуктах, смывах всегда свидетельствует о загрязнении объекта разлагающимися субстратами и о крайне неблагополучном санитарном состоянии. Пищевые продукты, загрязненные протеем, обычно выбраковывают; воду, содержащую протей, нельзя пить. Определение протеев рекомендовано при исследовании воды открытых водоемов, лечебных грязей. А при исследовании пищевых продуктов обнаружение протеев предусмотрено ГОСТ.

Clostridium perfringens

Как СПМ предложен еще в 1895 г., почти одновременно с E.coli . Уилсон и Блейр (1924-1925 гг) предложили железо-сульфитную среду, которая позволяет дифференцировать клостридии фекального происхождения от клостридий, обитающих во внешней среде. Кишечные клостридии восстанавливают сульфиты и вызывают почернение среды, а свободноживущие клостридии не имеют сульфит-редуктазы и не изменяют цвет среды. Почернение среды могут вызвать и некоторые другие микроорганизмы, поэтому для подавления роста сопутствующей микрофлоры рекомендуют посевы культивировать при 43-44,5 0 С или прогревать пробы при 80 0 С 15-20 минут. Т.о., Clostridium perfringens легко выделять и дифференцировать. Однако, у Clostridium perfringens как у СПМ есть определенные недостатки.

1. Палочка не всегда присутствует в кишечнике человека.
2. Clostridium perfringens длительно сохраняется во внешней среде за счет спорообразования. Поэтому обнаружение этого микроорганизма свидетельствует о некогда имевшем место фекальном загрязнении. Это индикатор возможного присутствия энтеровирусов.
3. Clostridium perfringens может размножаться во внешней среде (в некоторых видах почв). Для прорастания спор необходим «температурный шок», т.е. прогревание при 70 0 С 15-30 минут.

В настоящее время о давности фекального загрязнения объекта предложено судить по сопоставлению количества споровых и вегетативных форм Clostridium perfringens. С этой целью определяют количество клостридий в прогретых и непрогретых пробах.

А) В прогретых пробах индекс будет представлен только споровыми формами, свидетельствующими о давнем загрязнении (в свежих фекалиях 80-100% составляют вегетативные клетки).

Б) В непрогретых пробах выявляют вегетативные и споровые формы.

Количественный учет клостридий предусмотрен при исследовании почвы, лечебных грязей, воды открытых водоемов.

Clostridium perfringens не должны обнаруживаться в 100 мл воды на предприятиях пищевой промышленности. Определение микроба проводят и в некоторых пищевых продуктах, но уже как возможного возбудителя пищевых отравлений. Критический уровень Clostridium perfringens в готовых блюдах равен 10 клеток в 1 мл или 1 г продукта. Готовые консервы не должны содержать Clostridium perfringens.

По соотношению количеств кишечной палочки, энтерококков и клостридий судят о давности фекального загрязнения.

Бактерии рода Salmonella

Являются наиболее распространенными возбудителями ОКЗ и поэтому могут быть индикаторами возможного присутствия других возбудителей инфекций с аналогичным патогенезом и эпидемиологией.

В последние десятилетия сальмонеллы широко распространены во внешней среде. Увеличилось число лиц – бактерионосителей (до 9,2%), выделяющих во внешнюю среду миллионы и миллиарды клеток с каждым граммом фекалий, носительство у животных еще более выражено. В сточных водах мясоперерабатывающих предприятий сальмонеллы обнаруживают в 80-100% проб, в очищенных сточных водах – в 33-95% образцов; бактерии обнаруживают также в хлорированных сточных водах.

Особенности сальмонелл как СПМ

1. Эти микроорганизмы попадают во внешнюю среду только с фекалиями человека и животных. Их обнаружение всегда свидетельствует о фекальном загрязнении.
2. Сальмонеллы не размножаются в почве; в воде они размножаются лишь при высокой температуре и высоком содержании органических веществ.
3. При определении сальмонелл следует определять не только процент положительных находок, но и НВЧ. Только НВЧ позволяет прогнозировать подъемы сальмонеллезов и других ОКЗ со сходной этиологией.

Вирусы бактерий

В качестве СПМ предлагают использовать бактериофаги кишечных бактерий (эшерихий, шигелл, сальмонелл). Кишечные фаги постоянно обнаруживают там, где есть бактерии, к которым они адаптированы. Однако как показатели возможного присутствия патогенных бактерий они имеют некоторые недостатки. Например, бактериофаги выживают во внешней среде дольше (8-9 месяцев), чем соответствующие бактерии (4-5 месяцев). Но как показатели фекального загрязнения бактериофаги имеют существенную ценность.

1. Бактериофаги выделяют из сточных вод с той же частотой, что и многие патогенные вирусы (полиомиелита, Коксаки, гепатита А).

2. Сходство с энтеропатогенными вирусами дополняет устойчивость к дезинфектантам.

3. Методы обнаружения фагов довольно просты. Посевы производят в бульон с индикаторной бактериальной культурой. После инкубирования делают пересевы на плотный агар, сравнивают КОЕ в опыте и контроле и делают выводы.

Бактерии рода Staphylococcus

Стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры. Основным местом их локализации служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей человека и некоторых теплокровных животных, а также кожные покровы. Присутствуют стафилококки и в кишечнике здоровых людей. В окружающую среду стафилококки попадают при разговоре, кашле, чихании, а также с кожи. Загрязнение воды водоемов и бассейнов происходит при купании людей, при этом в бассейнах число стафилококков может достигать десятков тысяч в 1 л воды. С распространением стафилококков в окружающей среде тесно связана проблема внутрибольничных инфекций стафилококковой природы, которая связана с носительства патогенных стафилококков у людей, особенно среди медицинского персонала. Все это позволяет отнести стафилококки к бактериям-индикаторам воздушно-капельного загрязнения.

Стафилококки относятся к семейству Micrococcaceae, роду Staphylococcus. Вид S.aureus относится к патогенным.

Как санитарно-показательные микроорганизмы стафилококки имеют некоторые особенности:

1. Они неприхотливы к питательным средам, методы индикации их в окружающей среде проще, чем, например, у стрептококков
2. Стафилококки обладают значительной устойчивостью к различным физическим и химическим факторам воздействия. Исходя из резистентности стафилококков к дезинфицирующим веществам (особенно препаратам хлора), предложено применять их в качестве СПМ загрязненности воды в зонах рекреации водоемов (в том числе морских), плавательных бассейнов.
3. Являются объективным показателем загрязнения воздуха закрытых помещений, поскольку показана корреляция между санитарно-гигиеническим сосоянием помещений, количеством находящихся в них людей, числом носителей патогенных стафилококков и содержанием стафилококков в воздухе.

Бактерии рода Streptococcus

Стрептококки, также как и стафилококки, являются обитателями верхних дыхательных путей человека и многих животных. Они постоянно и в больших количествах присутствуют в полости рта и носоглотке больных с хроническими стрептококковыми инфекциями верхних дыхательных путей, а также здоровых людей и поэтому могут попадать в воздух помещений с бактериальным аэрозолем при разговоре и кашле.

Основная трудность использования стрептококков в качестве санитарно-показательных микроорганизмов заключается в том, что стрептококки представляют обширную группу, объединяющую большое количество видов: от сапрофитов до патогенных стрептококков, вызывающих такие заболевания, как скарлатина, рожистое воспаление, сепсис и многие гнойно-воспалительные процессы.

Стрептококки относятся к семейству Streptococcaceaе, роду Streptococcus. Вид S.pyogenes имеет наибольшее значение в патологии человека.

В окружающей среде стрептококки представлены в основном α-гемолитическими стрептококками (не полностью разрушают эритроциты, образуют зеленоватые зоны вокруг колоний). Это обусловлено тем, что почти у 100% здоровых людей на поверхности миндалин находятся α-гемолитические стрептококки, в то время как β-гемолитические стрептококки (вызывают лизис эритроцитов и образуют зону гемолиза) – только у 25-75%.Принято целесообразным считать санитарно-показательными микробами воздуха суммарно α- и β-гемолитические стрептококки.

Особенности стрептококков как СПМ:

1. Стрептококки не очень устойчивы в окружающей среде, они могут сохраняться только в течение нескольких дней в пыли помещений, на белье, предметах обихода больного. Однако сроки сохранения их жизнеспособности близки к продолжительности жизни ряда патогенных бактерий, попадающих в окружающую среду воздушно-капельным путем (например, таких как возбудитель дифтерии и др.)
2. Показателем более свежего загрязнения воздуха помещений является α-гемолитический стрептококк как наименее устойчивый. В воздухе необитаемых человеком помещений стрептококки не обнаруживаются.
3. Методы индикации и идентификации стрептококков более сложны и трудоемки в сравнении с таковыми стафилококков.

Термофилы

Особое место среди СПМ занимают термофильные микробы, присутствие которых в почве или воде водоемов свидетельствует о загрязнении их навозом, компостом или разложившимися фекалиями людей.

К термофильным микроорганизмам относятся грамположительные бактерии, кокки, бациллы, спириллы, актиномицеты, немногие виды грибов, которые способны активно размножаться при температуре 60 0 С и выше. Большая часть термофилов – аэробы.

Термофильные микроорганизмы размножаются в компостных кучах и навозе, в которых благодаря их жизнедеятельности происходит нагревание до 60-70 0 С поверхностных слоев. В таких условиях идет процесс биотермического обезвреживания органических масс, подвергающихся самонагреванию, погибают патогенные микроорганизмы и кишечные палочки.

Таким образом, присутствие термофилов свидетельствует о давнем загрязнении почвы компостами, при этом БГКП (ОКБ) обнаруживаются в незначительных количествах. И, напротив, высокий титр БГКП (ОКБ) при малом числе термофилов – показатель свежего фекального загрязнения.

Термофилы служат также санитарно-показательными микроорганизмами для характеристики отдельных этапов процесса минерализации органических отходов.

Современная санитарная микробиология при индикации и идентификации санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов, при определении общей микробной обсемененности объектов окружающей среды стремится использовать все те методы, которые применяются в диагностических микробиологических лабораториях:

микроскопический – при индикации и прямом подсчете микроорганизмов в исследуемом объекте;

бактериологический – выделение микроорганизмов и их идентификация;

биологический – заражение чувствительных животных и ускоренные методы исследований (РИФ и др.).

Для получения разносторонней и полноценной санитарно-микробиологической характеристики объектов окружающей среды, как правило, используется комплекс тестов. К ним относится определение общей микробной обсемененности (общего микробного числа).

Общая микробная обсемененность объекта характеризуется количеством микроорганизмов в 1 мл воды, жидкости или в 1 г твердого вещества (продукта). Определение микробного числа является косвенным методом и позволяет судить о возможности загрязнения изучаемого объекта патогенными микроорганизмами.

Существует два метода определения микробной обсемененности:

Метод прямого подсчета под микроскопом;

Метод количественного посева различных разведений образцов и проб исследуемого объекта.

Первый метод – метод прямого подсчета микроорганизмов в исследуемом объекте проводится под микроскопом в счетных камерах Горяева или в камерах, специально сконструированных для подсчета бактерий. Предварительно пробу исследуемого объекта подвергают обработке, чтобы получить гомогенную взвесь. Для лучшего учета бактерий в исследуемую суспензию добавляют краситель.

Второй метод – метод количественного посева исследуемого материала на плотные питательные среды – применяется наиболее часто. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри (начиная с большего разведения, каждое разведение отдельной пипеткой) и заливают расплавленным и охлажденным до 45-50 0 С мясопептонным агаром.

Следует отметить, что оба метода определения общей микробной обсемененности, являются относительными и приблизительными. Для получения сравнимых результатов при определении общего микробного числа исследования проводятся по стандартным, конкретным для каждого случая методикам, регламентированным соответствующими ГОСТами.

Выявление в каждом конкретном случае порчи объекта окружающей среды ведется по схемам исследования, разработанным для каждой группы микроорганизмов.

Бактерии группы кишечных палочек (бгкп)

Впервые Escherihia coli (кишечную палочку) Т.Эшерих выделил в 1885 г из фекалий больного. Кишечная палочка является постоянным обитателем толстого отдела кишечника человека, млекопитающих, птиц и рыб. Среди бактерий E. сoli наряду с сапрофитными штаммами встречаются энтеропатогенные, способные вызвать желудочно-кишечные заболевания людей и животных.

Морфология. Это полиморфные палочки с закругленными концами длиной 1-3 мкм, грамотрицательные, не образующие спор, подвижные перитрихи (встречаются и неподвижные). Капсулу образуют лишь патогенные серовары (08, 09, 0101).

Культуральные свойства. Е. coli аэроб или факультативный анаэроб, оптимальная температура роста 37-38 0 С, рН среды 7,0-7,4. Хорошо растет на обычных питательных средах – МПА, МПБ, средах Эндо и Левина. На МПА через 24 ч появляются сочные, круглые с ровными краями и гладкой поверхностью (s-форма) серо-белого цвета колонии. В МПБ образуют интенсивное помутнение среды и осадок на дне пробирки, легко разбивающийся при встряхивании.

Биохимические (ферментативные) свойства у бактерий E. сoli хорошо выражены, в отличие от других бактерий семейства Enterobacteriaciae они сбраживают лактозу до кислоты и газа, что используется для дифференциации и идентификации.

К бактериям группы кишечной палочки отнесены 3 рода бактерий: Escherihia, Citrobacter и Enterobacter. Два последних рода близки, в отличие от рода Escherihia они имеют ограниченное санитарное значение и не расцениваются как показатели свежего фекального загрязнения, так как их чаще обнаруживают в почве, на растениях.

Во всех ранее существовавших классификациях уделялось большое внимание способности кишечных палочек сбраживать лактозу, так как считалось, что средой обитания лактозоотрицательных палочек являются почва, вода, растения.

В связи с неодинаковым санитарно-показательным значением отдельных родов в настоящее время для дифференциации Escherihia coli фекального происхождения от других БГКП (Citrobacter и Enterobacter) предложен комплекс признаков обозначенных абревиатурой - ТИМАЦ.

Т – температурный тест (тест Эйкмана);

И – тест на индолообразование;

М – реакция с метиловым красным;

А - реакция на ацетиметилкарбинол (реакция Фогес-Проскауэра);

Ц – цитратный тест.

Признаки, входящие в этот комплекс, определяют принадлежность БГКП к одному из трех родов: Escherihia, Citrobacter и Enterobacter.

Температурный тест. Для подтверждения фекального происхождения выделенных штаммов Escherihia coli, принимают ее способность сбраживать углеводы при температуре 43-44 0 С , превышающей температуру тела человека, т.е. температурный тест. Большинство бактерий родов Citrobacter и Enterobacter такой способностью не обладает.

Образование индола. Суть метода сводится к тому, что 98% выделенных штаммов Escherihia coli способны расщеплять аминокислоту триптофан, входящую в состав многих белков и пептонов питательной среды, с выделением ряда продуктов, в том числе и индола , окрашивающего питательную среду в красный цвет при взаимодействии с реактивами, содержащими параметиламидобензальдегид. Бактерии из родов Citrobacter и Enterobacter индол не образуют.

Реакция с метиловым красным (реакция Кларка). Эта реакция применяется для определения интенсивности кислотообразования при сбраживании глюкозы в питательной среде. В качестве индикатора используют метиловый красный, который изменяет окраску от светло-желтой до красной при рН 5,0 и ниже (при рН выше 5,0 среда остается светло-желтой). Считается, что типичные Escherihia coli сбраживают глюкозу до кислоты и газа более интенсивно, чем Enterobacter.

Образование ацетилметилкарбинола. С помощью этой реакции определяют способность микроорганизмов образовывать в среде с глюкозой ацетилметилкарбинол. Его образуют Enterobacter, а Escherihia coli и Citrobacter такой способностью не обладают.

Способность микроорганизмов образовывать в среде с глюкозой ацетилметилкарбинол определяют по следующей методике: к 5 мл культуры 4-5 суточного возраста, выращенной на пептонной воде с глюкозой или на среде Кларка, добавляют такой же объем 40%-ного раствора КОН. При наличии ацетилметилкарбинола среда окрашивается в розовый цвет.

Цитратный тест основан на способности некоторых микроорганизмов усваивать лимонную кислоту и ее соли в питательной среде.

Citrobacter и Enterobacter растут на цитратных средах и получили название цитратположительные бактерии, а Escherihia coli фекального происхождения не утилизируют цитрат и являются цитратотрицательными.

ГОСТом предусмотрено проведение цитратного теста при контроле молока и молочных продуктов на среде Козера.

Сбраживание лактозы. Во всех ранее существовавших классификациях уделялось большое внимание способности кишечной палочки сбраживать лактозу. Этот признак был дифференцирующим при определении санитарно-показательного значения изучаемых микроорганизмов. Считалось, что лактозоотрицательные варианты отличаются от лактозоположительных тем, что средой обитания их являются почва, вода, растения.

Однако в кишечнике человека и животных, а также во внешней среде можно обнаружить различные варианты кишечных палочек, которые имеют не типичные для рода Escherihia признаки. Это объясняется тем, что у кишечной палочки, под влиянием различных факторов внешней среды происходит изменение ряда биологических свойств: утрата способности сбраживать лактозу и ферментировать углеводы при 43 0 С и даже при 37 0 С.

Следовательно, этот признак нестабильный, поэтому в настоящее время при классификации или для подтверждения фекального происхождения выделенных штаммов кишечной палочки определяют способность не просто сбраживать лактозу, а способность сбраживать углеводы при температуре, превышающей температуру тела человека и животных, т.е. температурный тест.

В комплексе ТИМАЦ температурный и цитратный тесты являются основными, наиболее стабильными позволяющими дифференцировать БГКП фекального происхождения от бактерий группы кишечных палочек, обитающих во внешней среде.

Использование БГКП в качестве санитарно-показательных

микроорганизмов в пищевой санитарной микробиологии

БГКП считаются классическим индикатором фекального загрязнения объектов внешней среды. В зависимости от целей исследования учитывают всю группу кишечных палочек или отдельных ее представителей. БГКП с точки зрения их санитарно-гигиенического значения Г.П.Калина (1968) делит на 3 подгруппы.

К первой подгруппе можно отнести БГКП в широком смысле этого слова (грамотрицательные палочки, растущие на универсальных средах), сбраживающие глюкозу и лактозу или только глюкозу с образование К и Г (кислота и газ) при 37 0 С, которые не имеют собственно санитарного значения.

Во вторую группу входят бактерии, имеющие санитарно-показательное значение и указывающие на неопределенное по времени фекальное загрязнение, они обладают свойствами, характерными для первой подгруппы, но сбраживают глюкозу и лактозу или глюкозу при 43-45 0 С.

В третью подгруппу включают бактерии, являющиеся показателями свежего и несомненно фекального загрязнения (E. сoli). К ним относятся микроорганизмы, обладающие свойствами, характерными для бактерий второй подгруппы, но не растущие на среде Козера с цитратными солями и сбраживающие углеводы при 43-45 0 С.

В настоящее время многие исследователи считают, что при оценке качества воды и пищевых продуктов санитарно-показательное значение имеют представители любой из подгрупп кишечной палочки, способные размножаться при 43 0 С и сбраживать глюкозу с образованием газа.

Энтеропатогенные кишечные палочки

В своей естественной среде обитания – содержимом толстого кишечника – кишечная палочка является комменсалом и, несомненно, играет положительную роль.

В то же время в литературе многократно были описаны вспышки пищевых токсикоинфекций, вызванных энтеропатогенными кишечными палочками. Исследования антигенного строения кишечной палочки показали, что возбудителями кишечных заболеваний являются определенные серологические типы E. сoli:

У телят чаще выделяются серогруппы 08, 09, 015, 0101 и др;

У поросят – 08, 09, 0137, 0138 и др;

У человека 026, 055, 0111 и некоторые другие серогруппы, в основном обладающие соматическим О-антигеном. Эти типы относятся к энтеропатогенным.

Энтеропатогенные кишечные палочки вызывают заболевания: колибактериоз молодняка, мастит у коров, острые кишечные заболевания у детей. Энтеропатогенные типы кишечных палочек выделяются и от здоровых людей и животных. Имеются мнения, что основной причиной заболевания могут являться токсины, вырабатываемые кишечными палочками прижизненно и, следовательно, заболевания можно рассматривать скорее как интоксикацию, чем токсикоинфекцию.

Возможность возникновения заболевания у людей зависит от ряда факторов – дозы микроба, возраста заболевшего, состояния организма и др.

Обеззараживание условно годного мяса . Если есть дистрофические изменения в мышцах, то туши и внутренние органы подлежат утилизации. При отсутствии таких изменений, на утилизацию направляют только внутренние органы, а туши используют для приготовления продукции, в технологическом процессе которой предусматривается термическая обработка.

Из остатков жизнедеятельности человека. Этот микроорганизм является постоянным обитателем толстого отдела кишечника человека и животных. Кроме Е. coli, в группу кишечных бактерий входят эпифитные и фитопатогенные виды, а также виды, этиология (происхождение) которых пока не установлена. К бактериям группы кишечных палочек относят роды Escherichia (типичный представитель Е. coli), Citrobacter (типичный представитель Citr. coli citrovorum), Enterobacter (типичный представитель Ent. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности морфологических и культуральных свойств. Они характеризуются различными ферментативными свойствами и антигенной структурой.

Морфология

Бактерии группы кишечных палочек - это короткие (длина 1-3 мкм , ширина 0,5-0,8 мкм) полиморфные подвижные и неподвижные грамотрицательные палочки, не образующие спор .

Культуральные свойства.

Колонии E. coli на плотной питательной среде

Бактерии хорошо растут на простых питательных средах: мясопептонном бульоне (МПБ), мясопептонном агаре (МПА). На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды; осадок небольшой, сероватого цвета, легкоразбивающийся.Образуют пристеночное кольцо, пленка на поверхности бульона обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с серовато-голубым отливом, легко сливающиеся между собой. На среде Эндо образуют плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным металлическим блеском (Е. coli) или без блеска (E.aerogenes). Для лактозоотрицательных вариантов кишечной палочки (B.paracoli) характерны бесцветные колонии. Им свойственна широкая приспособительная изменчивость, в результате которой возникают разнообразные варианты, что усложняет их классификацию.

Биохимические свойства

Большинство бактерий группы кишечных палочек (БГКП) не разжижают желатина , свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов , аммиака , сероводорода , обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других сахаров , а также спиртов . Не обладают оксидазной активностью. По способности расщеплять лактозу при температуре 37°С БГКП делят на лактозоотрицателъные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или колиформные, которые формируются по международным стандартам. Из группы ЛКП выделяются фекальные кишечные палочки (ФКП), способные ферментировать лактозу при температуре 44,5°С. К ним относится Е. coli, не растущая на цитратной среде.

Устойчивость

Источники

Р.П. Корнелаева, ПП. Степаненко, Е.В. Павлова Санитарная микробиология сырья и продуктов животного происхождения. 2006, с.15-18

Wikimedia Foundation . 2010 .

Смотреть что такое "Бактерии группы кишечных палочек" в других словарях:

бактерии группы кишечных палочек - 3.2 бактерии группы кишечных палочек; БГКП, коли формы: Микроорганизмы семейства энтеро бактерий родов эшерихия, цитробактер, энтеробактер, клебсиелла, серратия; бесспоровые, грамотрицательные, аэробные и факультативно анаэробные палочки,… …

Под именем бактерий в науке известны мельчайшие, микроскопической величины организмы, принадлежащие к растительному царству. По своей организации, по своим морфологическим особенностям, Б. ближе всего стоят к так называемым циановым или… … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона

См. также: Кишечная палочка Бактерии группы кишечной палочки (БГКП, также называются колиморфными и колиформными бактериями) условно выделяемая по морфологическим и культуральным признакам группа бактерий семейства энтеробактерий, используемая… … Википедия

Кишечная палочка Фотография Escherichia coli через СЭМ Научная классификация Царство: Бактерии … Википедия

ТИМАЦ Комплекс тестов для дифференцирования отдельных родов бактерий группы кишечных палочек Т температурный тест (тест Эйкмана); И тест индолообразования; М реакция с метиловым красным; А реакция на ацетилметилкарбинол (реакция … Википедия

ГОСТ Р 53430-2009: Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа - Терминология ГОСТ Р 53430 2009: Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа оригинал документа: 3.2 бактерии группы кишечных палочек; БГКП, коли формы: Микроорганизмы семейства энтеро бактерий родов эшерихия,… … Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации

Вологодское масло несолёное сладкосливочное масло с массовой долей влаги не более 16,0 %, производимое на территории Вологодской области, известное благо … Википедия

БГКП - большая группа кишечной палочки БГКП бактерии группы кишечных палочек

БГКП. К бактериям группы кишечных палочек (колиформных) относят роды Escherichia (типичный представитель E. coli ), Citrobacter (типичный представитель C. colicitrovorum ), Enterobacter (типичный представитель E. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности свойств.

Общая хар-ка БГКП : - палочки грамм-отрицательные, короткие; - не спорообразующие; - на среде Энда дают красные колонии с металлическим блеском - E.coli , красные – энтеробактерии, розовые – цитробактерии, б/цв – лактозо – отрицательные.Биохимические свойства. Большинство бактерий группы кишечных палочек (БГКП) не разжижают желатина, свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода, обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других сахаров, а также спиртов. Не обладают оксидазной активностью. Устойчивость. Бактерии группы кишечных палочек обезвреживаются обычными методами пастеризации (65-75°С). При 60°С кишечная палочка погибает через 15 минут. 1% раствор фенола вызывает гибель микроба через 5-15 минут.Санитарно-показательное значение. Бактерии рода Escherichia – постоян. обитатели кишечника чел и животн, и обнаружение их в воде и ПП свидетельств о свежем фекальном загрязнении. Бактерии родов Citrobacter и Enterobacte r могут находиться повсюду: в почве, на растениях, реже в кишечнике. Считают, что они предст собой результат изменен ишерихий после пребывания их во внешней среде и поэтому являются показателями более давнего фекального загрязнения. Значение БГКП:

В сыром молоке указывает - на на эпидемиологическую опасность

Через несколько часов при 8-10 о С - о нарушении условий хранения и реализации, транспортиров.

Появл. БГКП после пастеризации расценивают как 2-ое загрязнение

Наличие БГКП в готовой продукции указывает на - плохую мойку и дезинфекцию оборудования.

Род Salmonella . Сальмонеллезы относятся к числу наиболее распространенных токсикоинфекций. Обнаруж сальмонелл всегда свидетельствует о фекальном загрязнении. Сальмонеллы устойчивы к высоким концентрациям поваренной соли (особенно в средах, содержащих белок) и высушиванию. Сохраняют свою жизнеспособность в комнатной пыли, в различных почвах (97 мес.), в воде открытых водоемов (до 45 дн). Находясь в ПП, особенно в мясных, сальмонеллы очень устойчивы к тепловой обработке. Соление и копчение мяса оказывают слабое воздействие на сальмонелл. При размножении сальмонелл в молоке его внешний вид и вкус не изменяются, пастеризация молока в течение 30 мин при 85ºС в производственных условиях способствует полному уничтожению этих бактерий. Человек заражается сальмонеллами в результ употребл мяса и мясопродуктов. Молоко и молочные продукты гораздо реже явл причиной пищевых отравлений. Инфицирование молока главным образом происходит через загрязненную посуду, доильные аппараты, руки доильщиц и др. Возбудители сальмонеллезов могут попасть в ПП, изготовленные из растительного сырья (салаты и соусы столовые) не только в процессе производства, но и с пищевыми ингредиентами, в частности с сухими овощными приправами и специями.

Идентификация БГКП:

● Посев на среду обогащения - Кесслер, одновременная идентификация по газообразов.: есть газообразование - возможно БКГП, нет газообразования - нет БГКП

● Идентификация БГКП на среде Эндо: Из газ(+) пробирок отбирают по 1 мл и сеют на тв.среду Эндо, идентифицируют колонии БГКП по цвету, проводят дифференциацию по родам в зависимости от цвета колоний: Если есть красные, розовые и бледно-розовые культуры - значит присутствуют БГКП, если нет колоний – нет БГКП. Если есть колонии, но бесцветные - подозрение на патогены. Далее по цвету идентифицируют роды БГКП: 1) красные - с металлич. оттенк. – эшерихия 2) розовые – энтеробактер 3) бледно-розовые - со слизью – клебсиела 4) бледно-розовые - цитробактер, церрации 5) бесцветные (лактозо (-)) - протей 6) прозрачные мелкие – патогенны

● Идентификация на среде Козера: выращивание на среде с глюкозой/лимонной кислотой, Т=43°С,24ч. М/о цитрат(+) меняют цвет красителя с зеленого на васильковый. М/о цитрат(-) не меняют цвет.

Определяют по количеству положительных проб в 3 пробирках.

Сальмонеллы – патогенны, анализируют в 25 г продукта, их там не должно быть. Служат индикатором патогенов.

Выявление сальмонелл проводится в 4 этапа

1) первичный (прямой) посев - Посев на среду Энда и Плоскирава на сутки и Т=37 0 С. На ср. Энда – прозрачные колонии,

2) обогащение (посев на жидкие селективные среды, термостатирование)

3) посев со среды обогащения осущ после обогащения на плотные диагностические среды, термостатирование - на ср. Плоскирава- прозрачные,но более мелкие чем на среде Эндо

4) подтверждение путем установления ферментативных и серологических свойств сальмонелл

©2015-2019 сайт
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2017-04-20

Кто такие БГКП и где они живут

ГОСТ для колиформных бактерий

Разработан межгосударственный стандарт по методам выявления и определения количества колиформных микробов. Этот ГОСТ обеспечивает безопасность пищевых продуктов. Любая продукция, входящая в список ГОСТа, должна пройти лабораторные исследования. После лабораторных анализов, доказывающих допустимые значения БГКП, продукция уходит на реализацию. Обязательному исследованию подлежат:

• Вода.
• Консервы.
• Мясная продукция.
• Корма для животных.
• Посуда и оборудование.

Важно знать, что ГОСТ не распространяется на молоко и молочные продукты. Все молоко и другая молочная продукция, купленная на разлив или на развес, должна подвергаться пастеризации с целью уничтожения колиформных микроорганизмов. Пастеризация – нагрев до +80⁰С в течение 30 минут.

ГОСТ обязывает следить и за санитарно-бактериологическим состоянием воды. Забор воды на определение наличия БГКП производят из:

• Городской системы водоснабжения.
• Открытых водных резервуаров (рек, морей, водоемов).
• Источников питьевой воды (колодцы, ключи).
• Плавательных бассейнов.
• Сточных вод (до и после очистки).

Мойте руки!

Все виды бактерии группы кишечных палочек погибают при кипячении или пастеризации. В молоке, мясе и воде не останется токсинов вида эшерихии и сальмонеллы при температуре выше + 60⁰С. Ручки двери или поверхность стола нужно протереть дезинфицирующим раствором. Колиформные бактерии мгновенно погибают от спирта или другого антибактериального агента. Но самым надежным способом профилактики кишечных заболеваний по ГОСТу и по жизненному опыту является мытье рук с мылом. Щелочная среда мыла разрушает стенки микробов. Если нет возможности вымыть руки, например, в дороге, воспользуйтесь дезинфицирующими влажными салфетками или гелем для рук.